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Sequenom 质谱检测平台

MassARRAY 分子量阵列技术是 Sequenom 公司推出的世界上领先的基因分析工具,通过引物延伸或切割反应与灵敏、可靠的MALDI-TOF质谱技术相结合,实现基因分型、DNA甲基化检测。

检测原理| 平台设备|

MassARRAY检测过程大体可分为分子生物学反应,质谱阵列的点样和质谱检测三个环节。

 

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Sequenom 检测基于基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption /ionization–time of flight,MALDI-TOF)原理。质谱仪器主要由两部分组成:基质附助激光解吸电离离子源(MALDI)和飞行时间质量分析器(TOF)。用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量传递给生物分子,而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子,而使生物分子电离;离子在电场作用下加速飞过飞行管道,根据到达检测器的飞行时间不同而被检测,即测定离子的质荷比(M/Z)与离子的飞行时间成正比。

 

 

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基于 MassARRAY 分子量阵列平台的iPLEX GOLD技术可以设计最高多达60重PCR反应和基因型检测,实验设计非常灵活,分型结果准确性高。根据应用需要,对于数十到数百个SNP位点进行数百至数千份样本检测时,MassARRAY具有最佳性价比。特别适合于对全基因组研究发现的结果进行验证,或者是有限数量的研究位点已经确定的情况。

 

Sequenom 公司DNA甲基化分析采用MassARRAY EpiTYPER流程,该过程结合碱基特异性酶切(分子切割)和MALDI-TOF检测原理,可实现多重CpG的分析检测,同时具有DNA甲基化定量分析 能力。Sequenom DNA甲基化检测由亚硫酸盐处理待测DNA开始,经过亚硫酸盐处理,DNA中未甲基化胞嘧啶(C)转变为尿嘧啶(U),而甲基化修饰的胞嘧啶不受影响,因此亚硫酸盐处理将产生甲基化特异的序列变化。通过PCR扩增过程引入T7-启动子序列,经T7 DNA聚合酶的体外转录过程得到各样本RNA产物,再经过碱基特异性酶切处理,得到RNA小片段,并用飞行质谱检测每个片段的分子量,最后 EpiTYPER程序完成数据的自动化处理并报告每个检测片段的甲基化程度。